ViroHQ™体液病毒提取试剂盒

背景介绍:

  • 冠状病毒是一个大型病毒家族,已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。
  • 确诊病例需有 病原学证据阳性 结果(实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性;或病毒基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源)。
  • 目前市面上新型冠状病毒检测试剂盒存在 假阴性率高 的问题。

ViroHQ™体液病毒提取试剂盒能做什么?

  1. 富集、提纯各种样本中的新冠病毒,为新冠病毒检测试剂盒 提高诊断灵敏度 。
  2. 全程耗时不足 1小时 。
  3. 适用于多种样本提取:鼻咽拭子、痰、尿液、粪便等。
  4. 能提取 大容量 的样本。

ViroHQ™需要的实验条件:

自备用品:

  1. 耗材:移液器吸头(10ul、20ul、100ul、1000ul)、1.5ml离心管、 15ml 离心管、50ml离心管。
  2. 仪器:低温台式离心机、-80℃冰箱、100-1000ul移液枪、吸管(5ml)、电动移液枪、试管架、记号笔。
  3. 试剂:1×PBS缓冲液(无菌)。

样品准备:

  1. 将收集的鼻/咽拭子加入 1mlPBS 缓冲液,使收集的体液充分溶解在 PBS 缓冲液中。痰液或尿液样品直接进行下一步。
  2. 样品按 0.1 倍体积加入 ME 缓冲液,混均但不要涡旋,室温孵育 15-30 分钟。
  3. 在 4℃下,2500×g 离心 15 分钟,以去除细胞碎片和盐类晶体。(如果需要,这种沉淀的细胞 颗粒可用于其他生物测定)。
  4. 将上清转移到一个新的 50ml 离心管中。(如果可以的话用 0.22μm 的滤膜过滤,或将上清在 17000×g, 4℃离心 10 分钟以去除大型微泡。)

提取病毒颗粒:

  1. 依次向管中加入 0.5 倍体积的缓冲液 P1,0.5 倍体积的缓冲液 P2,0.01 倍体积的缓冲液 D 和缓 冲液 F,并充分混匀(注意不要用涡旋混合仪混合),静置 20 分钟,然后 2500×g,4℃离心 15 分钟。
  2. 离心后,用移液管小心吸去上清液,不要触碰底部沉淀, 并留下最后的约 1ml 上清。
  3. 转移沉淀和余下的上清液至一个新的 1.5ml 管中,在 4℃下 2500×g 离心 3-5 分钟。
  4. 病毒颗粒沉淀在试管底部与界面之间,小心吸弃上清,不要触碰沉淀。
  5. 用适量的 PBS 重悬病毒颗粒待用,如果需要过夜,请将病毒保存于 4℃,在-20℃或-80℃能保 存更长时间,但要注意避免反复冻融。

注意事项:

  1. ViroHQ™试剂盒储存于 2-8℃,正确存储的试剂盒有效期为 2 年。
  2. 为了保存病毒蛋白质和核酸的完整性,在分离病毒颗粒后建议立即进行下一步的蛋白或核酸提取。