ExoHQ™尿液外泌体提取试剂盒

产品描述：

外泌体是大多数细胞在体内和体外分泌的小膜泡（直径约 20-200nm）。外泌体存在于血液、尿液、 羊水、腹水中，含丰富的 DNA, RNA 和蛋白质, 可以用于诊断和治疗多种疾病。

外泌体生物学研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐，硬件要求高， 操作难度大。ExoHQ™ 尿液外泌体提取试剂盒步骤简单，操作方便，用时短，适用于尿液中的外泌体提取，可快速高效获得高纯度的外泌体颗粒。

操作规程：

尿液收集：

1. 在收集尿液之前，建议用干净的纸擦拭尿道口。
2. 为避免样品间的较大差异，建议用晨尿进行外泌体分离。
3. 如果尿液外泌体用于蛋白质组分分析，应该在尿液中添加蛋白酶抑制剂和防腐剂。
4. 所有尿液样本应该在 4 小时内处理，以避免形成沉淀，沉淀中会包含有外泌体，这样做可以减少外泌体损失；如果不能立即处理应该在去除细胞后放置-80℃保存，但要注意避免反复冻融。

准备样品：

1. 向新鲜的尿液样品按 0.1 倍体积加入 ME 缓冲液，混均但不要涡旋，室温孵育 15-30 分钟。
2. 在 4℃下，2500×g 离心 15 分钟，以去除细胞碎片和盐类晶体。（如果需要，这种沉淀的细胞颗 粒可用于其他生物测定）。
3. 将上清转移到一个新的 50ml 离心管中。（如果可以的话用 0.22μm 的滤膜过滤，或将上清在 17000×g,4℃离心 10 分钟以去除大型微泡。）

提取外泌体：

1. 依次向管中加入 0.5 倍体积的缓冲液 P1，0.5 倍体积的缓冲液 P2，0.01 倍体积的缓冲液 D 和缓 冲液 F，并充分混匀（注意不要用涡旋混合仪混合），静置 20 分钟，然后 2500×g，4℃离心 15 分钟。
2. 离心后，用移液管小心吸去上清液，不要触碰底部沉淀, 并留下最后的约 1ml 上清。
3. . 转移沉淀和余下的上清液至一个新的 1.5ml 管中，在 4℃下 2500×g 离心 3-5 分钟。
4. 外泌体沉淀在试管底部与界面之间，小心吸弃上清，不要触碰沉淀。
5. 用适量的 PBS 重悬外泌体待用，如果需要过夜，请将外泌体保存于 4℃，外泌体在-20℃或-80 ℃能保存更长时间，但要注意避免反复冻融。

需自备用品：

1. 耗材：移液器吸头（10ul、20ul、100ul、1000ul）、1.5ml 离心管、 15ml 离心管、50ml 离心管。
2. 仪器：低温台式离心机、-80℃冰箱、100-1000ul 移液枪、吸管（5ml）、电动移液枪、试管架、 记号笔。
3. 试剂：1×PBS 缓冲液（无菌）。

注意事项：

1. ExoHQTM试剂盒储存于 2-8℃，正确存储的试剂盒有效期为 2 年。
2. 为了保存外泌体内蛋白质和核酸的完整性，在分离外泌体后建议立即进行下一步的蛋白或核酸提取。