ExoHQ™细胞培养液外泌体提取试剂盒
产品描述：
外泌体是大多数细胞在体内和体外分泌的小膜泡（直径约 20-200nm）。外泌体存在于血液、尿液、 羊水、腹水、细胞上清中，含丰富的 DNA，RNA 和蛋白质，可以用于诊断和治疗多种疾病。
外泌体生物学研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐，硬件要求高， 操作难度大。ExoHQ™ 细胞上清外泌体提取试剂盒步骤简单，操作方便，用时短，适用于细胞上清中的外泌体提取，可快速高效获得高纯度的外泌体颗粒。
操作规程：
细胞上清收集：
镜检下细胞覆盖率为 80-90％的时候，将新鲜的培养基加入到细胞中，培养 24-48 小时后，收集细胞培养基，也可延长培养时间。如果在您的培养基中使用了任何动物血清，确保动物血清(如 FBS/FCS)不含外泌体。如果您有困难得到去外泌体的血清，您可以使用无血清或血清减少的培养基。收集的细胞培养基，应先去除细胞，大的微泡和凋亡小体。然后，可在-80℃长期冻存。避免反复冻融。
准备样品：
- 取一定量的细胞上清，在 4℃下，2500×g 离心 15 分钟，以去除细胞碎片和盐类晶体。（如果需要，这种沉淀的细胞颗粒可用于其他生物测定）。
- 将上清转移到一个新的 50ml 离心管中。（如果可以的话用 0.22μm 的滤膜过滤，或将上清在 17000×g, 4℃离心 10 分钟以去除大型微泡。）
提取外泌体：
- 依次向管中加入 0.5 倍体积的缓冲液 P1，0.5 倍体积的缓冲液 P2，0.01 倍体积的缓冲液 D 和缓 冲液 F，并充分混匀（注意不要用涡旋混合仪混合），静置 20 分钟，然后 2500×g，4℃离心 15 分钟。
- 离心后，用移液管小心吸去上清液，不要触碰底部沉淀, 并留下最后的约 1ml 上清。
- 转移沉淀和余下的上清液至一个新的 1.5ml 管中，在 4℃下 2500×g 离心 3-5 分钟。
- 外泌体沉淀在试管底部与界面之间，小心吸弃上清，不要触碰沉淀。
- 用适量的 PBS 重悬外泌体待用，如果需要过夜，请将外泌体保存于 4℃，外泌体在-20℃或-80 ℃能保存更长时间，但要注意避免反复冻融。
需自备用品：
- 耗材：移液器吸头（10ul、20ul、100ul、1000ul）、1.5ml 离心管、 15ml 离心管、50ml 离心管。
- 仪器：低温台式离心机、-80℃冰箱、100-1000ul 移液枪、吸管（5ml）、电动移液枪、试管架、 记号笔。
- 试剂：1×PBS 缓冲液（无菌）。
注意事项：
- ExoHQ™试剂盒储存于 2-8℃，正确存储的试剂盒有效期为 2 年
- 为了保存外泌体内蛋白质和核酸的完整性，在分离外泌体后建议立即进行下一步的蛋白或核酸提取。